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產品簡介
EZ Trans siRNA轉染試劑，是一種基于陽離子高分子聚合物開發的新型轉染試劑，適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉染。
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AC04L051、AC04L052 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 300uL、1mL | 供貨周期 | 現貨 |
| 應用領域 | 化工,生物產業,綜合 |
產品描述
EZ Trans siRNA轉染試劑，是一種基于陽離子高分子聚合物開發的新型轉染試劑，適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉染。本產品能在多種常見細胞中實現高效率、低毒性的轉染效果，且具有操作簡便，重復性佳等優點，適用于 siRNA或miRNA 介導的基因抑制實驗。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
EZ Trans siRNA轉染試劑 | AC04L051 | 300 uL |
EZ Trans siRNA轉染試劑 | AC04L052 | 1 mL |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃保存，有效期 6個月；-30℃至-10℃保存，有效期12個月。注：避免反復凍融。
使用方法（以 24 孔板為例，其他培養皿中轉染請參考表 1）
1． 接種細胞
對于貼壁細胞：轉染前一天，將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板，使其在轉染時密度為60%-80% 為佳。
對于懸浮細胞：轉染當天，配制轉染試劑-核酸復合物之前，用PBS清洗細胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養基 (無血清) 重懸細胞，在24孔板中進行細胞鋪板，細胞密度為60-80%。
2． 準備轉染試劑-siRNA復合物（或轉染試劑-miRNA復合物）
(1) 對于每孔細胞，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉染試劑與siRNA 混合，室溫孵育3 min。
(2) 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養基(無血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉染試劑-核酸復合物。
(3) 30 min后，往上述復合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養基(無血清)，輕輕混勻。
3． 轉染細胞
(1) 細胞用 PBS 清洗 1-2 次，將上述 350µL 轉染試劑-siRNA 復合物加入每孔細胞。可在轉染 6h 后換液或者補充 150μL 培養基 (含血清)，總體積達到 500μL，即達到常規的培養皿使用培養液的量。
(2) 在 37℃，5% CO2 培養箱培養 24-48 h，之后即可檢測基因干擾效果或者后續功能實驗。
注意事項
1、本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
2、小 RNA(siRNA/miRNA)質量：請務必使用高純度無內毒素轉染級 RNA。
3、整個實驗過程使用無 RNA 酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。
4、細胞條件：細胞狀態會極大影響轉染效率，待轉染細胞應處于良好生長狀態，建議使用生長處于指數期、存活率大于 90% 的細胞進行轉染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。
5、siRNA 與轉染試劑使用比例：對于大多數細胞系，轉染復合物中siRNA (20 μM Stock)與轉染試劑的比例在1:1 至1:3 之間，推薦比例為1:2。想要獲得優的基因干擾結果，需要對這一比例進行優化。
6、由于某些特殊培養基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導的轉染，因此建議測試這些培養基與本產品的相容性，以確保最佳轉染效果。
7、細胞類型、基因特性、siRNA/miRNA 的效力、靶 mRNA 的半衰期和靶蛋白的周轉率等因素都會影響siRNA/miRNA 介導的基因敲低效果。
8、建議 siRNA/miRNA 工作濃度在 10-100nM 之間，轉染試劑的體積應根據 siRNA/miRNA 濃度和培養皿的大小進行調整，請參見表 1。
表 1：不同培養體積對應的待轉siRNA/miRNA、 EZ Trans、稀釋液用量
培養器皿 | 培養液體積 （mL） | RNA （20 μM ） （μL） | 轉染試劑 (μL) | Opti-MEM I培養基a (μL) | Opti-MEM I培養基b (μL) |
96 孔板 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 20 | 50 |
24 孔板 | 0.5 | 1 | 2 | 100 | 250 |
12 孔板 | 1 | 2 | 4 | 200 | 500 |
6 孔板 | 2 | 4 | 8 | 400 | 1000 |
60 mm 培養皿 | 4 | 8 | 16 | 800 | 2000 |
100 mm 培養皿 | 10 | 20 | 40 | 2000 | 5000 |
注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。a: 稀釋轉染試劑-RNA復合物所需培養基的量；b: 加入轉染試劑-RNA復合物的培養基的量。
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