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產(chǎn)品中心蛋白與免疫免疫磁珠鏈霉親和素磁珠
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品貨號 產(chǎn)品規(guī)格 原價 AP62L182 1mL 700 ......
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品描述
鏈霉親和素磁珠，也稱 Streptavidin 磁珠或 SA 磁珠，是粒徑為 200nm 的納米磁珠，表面共價結(jié) 合了大量的高質(zhì)量的鏈霉親和素。Streptavidin納米級磁珠由于高的表面積與體積比，會提供更多結(jié)合位點，磁珠使用量更少，非特異性吸附率低，可以快速、高效、靈敏、特異性地與（Biotin）標記的抗體、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子結(jié)合。主要用于分離純化標記的核酸、抗體、蛋白或相關(guān)復合物等，用于免疫沉淀（IP）、細胞分選、DNA-蛋白相互作用研究等。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
鏈霉親和素磁珠 | AP62L182 | 1 mL |
鏈霉親和素磁珠 | AP62L183 | 5*1 mL |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃保存，有效期12個月。注：避免凍融或離心磁珠。
技術(shù)參數(shù)
基質(zhì) | 硅基磁珠 |
配體 | 重組 Streptavidin 蛋白 |
粒徑 | 200nm |
磁珠濃度 | 10mg/mL |
結(jié)合能力 | ≥0.5mg 化 IgG/mL 磁珠 |
適用范圍 | 分離純化：結(jié)合化核酸等； 分子相互作用：IP，Co-IP，RNA Pulldown 等。 |
使用方法
（一）結(jié)合化分子操作流程
使用前自備緩沖液：以下是常用的緩沖液成分，用戶可根據(jù)需要調(diào)整鹽濃度和pH
緩沖液 | 配方 |
Buffer 1（適用于結(jié)合化核酸） | 10mM Tris-HCl(pH 7.5)，1mM EDTA，1M NaCl，0.01-0.2% Tween-20 |
Buffer 2（適用于結(jié)合化抗體/蛋白） | PBS（pH7.4）,0.05% Tween 20， 可根據(jù)需要添加 0.01-0.1%BSA |
1. 結(jié)合化核酸：
(1) 將磁珠置于漩渦振蕩器上20s，振蕩重懸磁珠。用移液器移取 100μL 磁珠到新的離心管中。將離心管置于磁力架上，靜置 1min（此操作后續(xù)簡稱為磁性分離），用移液器吸去上清液，從磁力架上取下離心管。
(2) 加入1mL Buffer 1 到離心管中，蓋上離心管蓋，充分振蕩重懸磁珠。磁性分離，移去上清液。
(3) 重復“步驟 1 (2)"一次。
(4) 加入 500μL 的用 Buffer 1稀釋的化核酸，充分振蕩重懸磁珠。將離心管置于旋轉(zhuǎn)混合儀上，室溫旋轉(zhuǎn)混合 30min。
(5) 磁性分離，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管。按“步驟1 (2)"的方法洗滌磁珠 3 次。
(6) 根據(jù)后續(xù)實驗的要求，加入合適的低鹽緩沖液，重懸磁珠。至此結(jié)合化核酸步驟完成。磁珠可用于后續(xù)操作。
(7) 用戶可以通過測定反應前后核酸的濃度，計算結(jié)合到磁珠上的核酸量（反應前濃度-反應后濃度）×反應溶液體積。
2. 結(jié)合化抗體/蛋白：
(1) 將磁珠置于漩渦振蕩器上20s，振蕩重懸磁珠。用移液器移取 100μL 磁珠到新的離心管中。將離心管置于磁力架上，靜置 1min（此操作后續(xù)簡稱為磁性分離），用移液器吸去上清液，從磁力架上取下離心管。
(2) 加入 1mL Buffer 2 到離心管中，蓋上離心管蓋，充分振蕩重懸磁珠。磁性分離，移去上清液。
(3) 重復“步驟 2 (2)"兩次，共洗滌 3 次。
(4) 加入 1mL 的用 Buffer 2 稀釋的化抗體/蛋白，充分振蕩重懸磁珠。將離心管置于旋轉(zhuǎn)混合儀上，室溫旋轉(zhuǎn)混合 60 min。
(5) 磁性分離，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管。按“步驟2 (2)"的方法洗滌磁珠5次。
(6) 根據(jù)后續(xù)實驗的要求，加入合適的緩沖液，重懸磁珠。至此結(jié)合化抗體/蛋白步驟完成。磁珠可用于后續(xù)操作。
（二）化抗體免疫沉淀操作流程
1． 免疫復合物的制備：
以下實驗方案針對 2-10ug 化抗體，根據(jù)需要可以按比例放大。
(1) 在離心管中將每個樣品的細胞裂解液與2-10ug 免疫沉淀抗體結(jié)合。每個免疫沉淀反應推薦的總蛋白量為500-1500ug。
(2) 用IP Lysis/Wash Buffer將抗體以及制備好的樣品稀釋至 300-500μL。
(3) 在室溫下旋轉(zhuǎn)孵育1-2 h, 或 4℃ 2-4 h，以形成抗體和目標蛋白的免疫復合物。
注：樣品所需的量和孵育時間均依賴于每個特定的抗體和抗原體系，因而可能需要優(yōu)化，以達到效果；建議使用相應的同種亞型抗體對照，以便在你的抗體免疫沉淀中顯示特異性結(jié)合。
2． 免疫沉淀：
注：為保證磁珠均勻分布，使用前通過反復顛倒或輕微渦旋混勻瓶中磁珠。
(1) 將25-50µL 鏈霉親和素磁珠加入1.5 mL離心管中。
(2) 向磁珠中加入500 µL預冷PBS，輕柔混勻，使用磁力架分離磁珠，棄去上清。
(3) 向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer，顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻1min。用磁力架分離磁珠，棄去上清。
(4) 將抗原樣品/抗體免疫復合物加入裝有磁珠的離心管中，混勻儀上室溫孵育1-2 h，或 4℃，2-4 h。
(5) 用磁力架分離磁珠，除去未結(jié)合的樣品，并保存以備分析。
(6) 向離心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻5-10min，收集磁珠，棄上清。再重復洗兩次。
(7) 變性洗脫：向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（1×），將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min。通過磁力架分離磁珠，收集含有目的抗原的上清進行后續(xù)實驗。注：當使用的一抗檢測分子量在50或25kDa范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)時，建議使用構(gòu)象特異性二抗進行檢測，以盡量減少抗體重鏈或輕鏈的干擾；如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脫方式：
低pH洗脫：此方法為非變性洗脫法，洗脫的樣品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向離心管中加入100 µL 洗脫液（0.1M ，pH2.5），混勻在室溫下孵育離心管5-10 min。接著置于磁力架上靜置約30s，待磁吸后，收集上清至新的Ep管，并立即加入20 μL的中和緩沖液（1M Tris-HCl，pH8.0），將洗脫產(chǎn)物pH調(diào)節(jié)至中性，樣品用于后期功能分析。
注意事項
1. 本產(chǎn)品于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠，這些操作會導致磁珠 聚集而降低結(jié)合能力。
3. 實驗中 SA 與化分子結(jié)合的能力是有區(qū)別的，結(jié)合還會受到 Buffer 的影響，因此可自行優(yōu)化操作細節(jié)或者篩選及配制緩沖液進行實驗。
4. 如需分子與 SA 磁珠分離，可采用：① 0.1% SDS，煮沸 5min；② pH=8.2，含95%甲酰胺的 10mM EDTA 中，65℃ 5min 或 90℃ 2min。脫落率 95%。
5. 磁珠使用前應充分振蕩均勻。磁珠應保存在儲存溶液中，防止干燥。
相關(guān)產(chǎn)品推薦
1X PBS (無菌)（貨號：AC08L011）
Western/IP細胞裂解液（帶抑制劑）（貨號：AP01L076）
蛋白示蹤上樣緩沖液（5 x）（貨號：AP14L036）
本產(chǎn)品于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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