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產(chǎn)品中心染色試劑組織染色蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒
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產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品規(guī)格 原價(jià) AS11L011 200mL 280 ......
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產(chǎn)品描述
蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒綜合了多種經(jīng)典的方法配制而成。該溶液無(wú)汞，可用于免疫組化復(fù)染和H＆E染色。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒 | AS11L011 | 200mL |
產(chǎn)品組分
組分 | 規(guī)格 |
A. 蘇木素染液 | 100mL |
B. 伊紅染液 | 100mL |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。常溫保存，有效期12個(gè)月。
使用方法
1. 試劑準(zhǔn)備
酸酒精：在100mL 70%乙醇中加入1mL 鹽酸，室溫保存。注：冰凍切片后，各種步驟（干燥，乙醇或甲醇固定，熱固定，使用帶電的或有粘性的蓋片）保證組織切片在染色過(guò)程中不脫落。
2. 95%乙醇：在HE染色開(kāi)始前，組織切片需要固定并水化。將切片置于95%乙醇中約2min，開(kāi)始水化并固定組織。注：跳過(guò)使用95%乙醇對(duì)組織進(jìn)行水化和固定，并不影響形態(tài)學(xué)上的細(xì)節(jié)。
3. 水化：進(jìn)一步對(duì)組織切片進(jìn)行水化3-5min，并沖掉前一步殘留的乙醇。
4. 蘇木素：水化后，組織切片用蘇木素染色1-3min，可根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整染色時(shí)間。蘇木素是一種基本染料，可以對(duì)細(xì)胞的酸性成分進(jìn)行染色，包括核酸、粘多糖、酸性糖蛋白，將他們?nèi)境伤{(lán)色或藍(lán)紫色。注：沒(méi)有蘇木素，伊紅會(huì)將組織染成亮粉紅色；顯而易見(jiàn)的是缺乏細(xì)胞核。組織結(jié)構(gòu)很難區(qū)分，細(xì)胞內(nèi)成分幾乎都不存在，難以辨別。針對(duì)上述問(wèn)題，可以使用蘇木素進(jìn)行復(fù)染。
(1) 染色較弱是由于：自身溶解或者固定不好；過(guò)度脫鈣；染色時(shí)間不足；過(guò)度脫色（酸與醇的比例過(guò)高或者酸乙醇脫色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)）；蘇木素的作用較弱（蘇木素氧化過(guò)度（過(guò)老）或水稀釋過(guò)度）；漂洗溶液的污染；切片過(guò)薄；乙醇的去除或者染色前水的漂洗不充分。
(2) 染色過(guò)度是由于：組織切片干燥；蘇木素濃度過(guò)高；染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；載玻片粘合劑過(guò)多；脫色過(guò)弱或時(shí)間不足；切片過(guò)厚；熱暴露的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
5. 水洗：蘇木素染色后，用水洗組織是非常重要的。這一步以及隨后的水洗，可將多余的染料，媒染劑等去除。適當(dāng)?shù)钠纯梢匀コ砻娼饘俟鉂桑饘俟鉂煽勺柚固K木素的染色。注：跳過(guò)此步，將產(chǎn)生不好的結(jié)果，例如沉淀的形成，染液的稀釋?zhuān)砻娼饘俟鉂傻拇嬖凇?/p>
6. 酸酒精：酸酒精分色劑3-5s。在蘇木素染色方法中，組織切片有意過(guò)度染色，酸酒精將去除多余的染料以及玻片上的背景染色。
注：若省略此步驟，切片將呈暗紫色，嗜酸性結(jié)構(gòu)（如膠原）不會(huì)顯現(xiàn)出明亮的粉紅色，導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)之間難以區(qū)分，從而影響對(duì)切片的準(zhǔn)確判斷。另外，分色過(guò)度可能是由于：酸濃度過(guò)高；脫色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等。分色不足是由于：酸濃度過(guò)低；脫色時(shí)間不足；在切片上有多余的蛋白或者明膠等。
7. 水洗：水洗30s，終止酸酒精反應(yīng)，進(jìn)一步阻止酸酒精從組織切片上將大量蘇木素去除。注：如果切片沒(méi)有經(jīng)過(guò)漂洗，酸酒精可以過(guò)度脫色。如果不去除脫色劑，酸酒精將持續(xù)從組織切片上去除蘇木素。
8. 自來(lái)水沖洗或用藍(lán)化液藍(lán)化：自來(lái)水沖洗3-5min，可起到發(fā)藍(lán)處理，將紫紅色的蘇木素轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)紫色。通常，發(fā)藍(lán)試劑是pH依賴(lài)性的，由堿性溶液構(gòu)成。因此，如果自來(lái)水作為發(fā)藍(lán)試劑，pH值的每天監(jiān)控是非常重要的，因?yàn)樽詠?lái)水的pH值可能每天都會(huì)波動(dòng)。或用藍(lán)化液藍(lán)化，30s-1min；流動(dòng)的自來(lái)水沖洗5min；注：跳過(guò)發(fā)藍(lán)試劑步驟，將會(huì)導(dǎo)致蘇木素染液的顏色發(fā)生微妙的變化，難以區(qū)分。代替深藍(lán)色，細(xì)胞核將呈現(xiàn)紫色，有時(shí)甚至是紅色。細(xì)胞核不可過(guò)度藍(lán)染。如果組織染色過(guò)藍(lán)，一般是在組織切片上蘇木素過(guò)多所致。
9. 水洗：為伊紅復(fù)染做準(zhǔn)備，通過(guò)水洗30sec，將多余的發(fā)藍(lán)試劑去除。因?yàn)樵趬A性環(huán)境下，伊紅無(wú)法染色，水洗去除發(fā)藍(lán)試劑將允許伊紅保持其酸性pH值，使伊紅得以均勻復(fù)染。注：發(fā)藍(lán)試劑之后，如果沒(méi)有水洗，組織切片無(wú)法正確使用伊紅染色。因此，酸性結(jié)構(gòu)將被染為蒼白色并且不均勻，進(jìn)而導(dǎo)致錯(cuò)誤的判斷。
10. 伊紅：為了正確區(qū)分胞內(nèi)結(jié)構(gòu)，伊紅是出色的蘇木素復(fù)染劑。伊紅復(fù)染30-60s，可根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整染色時(shí)間。伊紅是酸性染料，可染細(xì)胞質(zhì)，尤其是線粒體、分泌顆粒和膠原。它可以區(qū)分細(xì)胞內(nèi)不同的細(xì)胞器以及不同的結(jié)締組織。注：使用伊紅復(fù)染組織切片的失敗，將導(dǎo)致組織切片的低分化。
(1) 染色較弱是由于：組織切片過(guò)薄；染色時(shí)間不足；隨后95%酒精分化過(guò)度。
(2) 染色過(guò)度是由于：染液濃度較高（可能是由于過(guò)度蒸發(fā)）；組織切片過(guò)厚；染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；隨后95%酒精分化不足。
(3) 伊紅染色未分化（一種顏色）是由于：固定不；過(guò)度染色（染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或染液濃度過(guò)高）。
11. 95%乙醇：95%乙醇處理2s-1min，根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整；伊紅分化將產(chǎn)生不同的粉色。注：如果95%乙醇被稀釋?zhuān)ɡ纾瑥那耙徊饺旧袛y帶了伊紅），分化的效果較差。
12. 99%乙醇：通過(guò)99%乙醇使組織切片脫色。99%乙醇處理1min；再用新的99%乙醇處理1min。注：這一步很難引起注意，若無(wú)95%乙醇，難以區(qū)分酸性結(jié)構(gòu)，組織切片成為粉色。若無(wú)99%乙醇脫水，組織切片不能脫水，導(dǎo)致在蓋片下形成水珠。這些水珠可與下一步的二甲苯結(jié)合而形成白色混濁物，這將影響組織切片的質(zhì)量。
13. 二甲苯：二甲苯處理5min。在充分脫水后，二甲苯可將組織切片上的酒精去除。去除酒精后，在載玻片上加蓋玻片時(shí)，二甲苯也可作為包埋劑確保可溶解。由于有潛在的毒性，二甲苯替代品，例如、環(huán)烷烴也可使用。替代品可提供相同的組織染色質(zhì)量，并且他們使用更安全，操作更簡(jiǎn)單。注：當(dāng)跳過(guò)此步驟時(shí)，不使用二甲苯透明，酒精將會(huì)保存于組織切片上，導(dǎo)致伊紅從切片上流出。
14. 封片：中性樹(shù)膠封片，自然風(fēng)干或烤干，顯微鏡觀察。
染色結(jié)果：細(xì)胞核染為藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)染為紅色。
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2． 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3． 試劑應(yīng)保存于陰涼、干燥、通風(fēng)良好的環(huán)境中。
4． 次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
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本產(chǎn)品于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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