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產(chǎn)品中心PCR&q-PCR直擴(kuò)PCRAN11L217、AN11L218一站式鼠尾基因快速鑒定試劑盒
產(chǎn)品簡介
一站式鼠尾基因快速鑒定試劑盒適用于從鼠尾、鼠耳、腳趾或其它組織快速提取基因組DNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而實(shí)現(xiàn)快速、便捷且準(zhǔn)確的小鼠基因型鑒定(genotyping)及基因組的相關(guān)分析。
產(chǎn)品分類
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| 品牌 | Life-iLab/李記生物 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
一站式鼠尾基因型快速鑒定試劑盒適用于從鼠尾、鼠耳、腳趾或其它組織快速提取基因組DNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而實(shí)現(xiàn)快速、便捷且準(zhǔn)確的小鼠基因型鑒定(genotyping)及基因組的相關(guān)分析。
本試劑盒可在10-15 min內(nèi)快速消化和提取鼠尾組織樣品的基因組DNA，有效簡化了鼠尾基因組DNA獲取過程。本試劑盒還提供了預(yù)配制的2X PCR Master Mix (Green)，內(nèi)含Taq DNA Polymerase，PCR Buffer，dNTP和上樣緩沖液，只需加入適量引物、模板和水即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR結(jié)束后，產(chǎn)物可直接進(jìn)行電泳分析，方便快捷。
推薦組織用量
3~5mm2 小鼠尾尖 (2~3mm)
5~10mm2小鼠耳朵 (3~5mm)
1個(gè)小鼠腳趾
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
一站式鼠尾基因快速鑒定試劑盒（Direct Mouse Genotyping Kit） | AN11L217 | 200 T |
一站式鼠尾基因快速鑒定試劑盒（Direct Mouse Genotyping Kit） | AN11L218 | 500 T |
產(chǎn)品組分
組分 | AN11L217 | AN11L218 | 保存條件 |
A. DNA extraction solution | 15 mL | 40 mL | 室溫 |
B. Stop solution | 15 mL | 40 mL | 室溫 |
C. 2X PCR Master Mix | 3*1 mL | 8*1 mL | -20℃ |
運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。組分按照保存條件保存，有效期12個(gè)月。
使用方法
1. 基因組提取步驟：
(1) 向每個(gè)樣本中加入70 μL DNA extraction solution，確保組織浸沒在溶液中。
(2) 在95℃的金屬浴或水浴中裂解處理10-15 min。裂解完成后，組織在外觀上仍然保持完整，但足量的基因組DNA已成功釋放，不影響后續(xù)的PCR實(shí)驗(yàn)。
(3) 裂解后，短暫離心去除管蓋內(nèi)壁的液滴，然后在室溫下靜置2 min。隨后加入70 μL終止液（Stop solution），輕輕混勻，終止裂解反應(yīng)。
(4) 12000 rpm離心2 min，取上清液作為PCR模板。上清液在消化后可在4℃保存一個(gè)月，或在-20℃下保存一年。
2. PCR擴(kuò)增步驟：
(1) 將2X PCR Master Mix（Green）置于冰浴或冰盒內(nèi)，并準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的引物、模板和水。
(2) 參考表1，在冰浴上配制PCR反應(yīng)體系。
(3) 使用移液器輕輕吹打或輕微漩渦混合（Vortex）以確保充分混勻。隨后，在室溫下短暫離心幾秒鐘，使液體集中于管底。
(4) 將配制好的PCR反應(yīng)體系放置在PCR儀中，啟動(dòng)PCR反應(yīng)。
(5) 可參考表2設(shè)置PCR反應(yīng)程序參數(shù)。PCR反應(yīng)結(jié)束后，可直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。
表1：PCR反應(yīng)體系
成分 | 用量 |
Template | 2 μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 μL |
2x PCR Master Mix | 10 μL |
ddH2O | 7 μL |
Total | 20 μL |
表2：PCR反應(yīng)程序設(shè)定
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94 ℃ | 2 min | 1 |
變性 | 94 ℃ | 30s | 30~35 |
退火 | 55 ℃ | 30s | |
延伸 | 72 ℃ | 30s (1kb/min) | |
終延伸 | 72 ℃ | 10 min | 1 |
臨時(shí)保存 | 4 ℃ | forever | ─ |
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. PCR產(chǎn)物少或沒有條帶。引物設(shè)計(jì)不佳是最常見的問題，需合理優(yōu)化引物；在室溫下配置反應(yīng)體系易引發(fā)非特異性擴(kuò)增，建議在冰浴中進(jìn)行；退火溫度不當(dāng)可能影響結(jié)果，建議使用溫度梯度PCR儀優(yōu)化，或通過多次PCR反應(yīng)找到最佳溫度；延伸時(shí)間不足。建議每1 kb片段延伸1 min，難以擴(kuò)增的片段可延長至1.5-2 min。
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