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產(chǎn)品中心核酸合成與提取RNA提取AP01L203柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒
產(chǎn)品簡介
柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒創(chuàng)新性地采用過柱純化的方法，能夠快速、溫和、高效地裂解動物組織或細胞，有效提取總蛋白，包括離心管柱和經(jīng)過優(yōu)化的細胞裂解液。與傳統(tǒng)的 RIPA 裂解液相比，本試劑盒可以提取出更多的蛋白，避免在細胞裂解過程中由于 DNA 沉淀和不溶性細胞碎片導(dǎo)致的部分蛋白丟失。
產(chǎn)品分類
相關(guān)文章
| 品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號 | AP01L204 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 100T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
本試劑盒創(chuàng)新性地采用過柱純化的方法，能夠快速、溫和、高效地裂解動物組織或細胞，有效提取總蛋白，包括離心管柱和經(jīng)過優(yōu)化的細胞裂解液。與傳統(tǒng)的RIPA裂解液相比，本試劑盒可以提取出更多的蛋白，避免在細胞裂解過程中由于DNA沉淀和不溶性細胞碎片導(dǎo)致的部分蛋白丟失。采用過柱純化技術(shù)，最小可處理20 μL樣本與裂解液混合物，最大可達500 μL。提供變性和非變性兩種細胞裂解液，用戶可根據(jù)后續(xù)的實驗需求選取不同的裂解液。
【注】：變性裂解液可用于SDS-PAGE，Western-blotting， ELISA 分析；非變性裂解液可用于IP，Co-IP，enzyme assays 等分析。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒 | AP01L203 | 50T |
柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒 | AP01L204 | 100T |
產(chǎn)品組分
運輸與保存
常溫運輸。組分A、B在4℃保存，組分C、D常溫保存，有效期12個月。【注】：研磨棒可重復(fù)使用。低溫下變性裂解液會出現(xiàn)成分析出，緩至室溫或水浴鍋溫浴即可。
使用方法
細胞樣品
一、 樣品裂解
變性液提取
1. 去除細胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液過少會使細胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。
2. 用槍吹打數(shù)下，轉(zhuǎn)移裂解液至離心管柱中。【注】：少量沒有裂解的細胞不影響最終蛋白提取的質(zhì)量。
3. 14,000 rpm 室溫離心1 min。
4. 收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液。【注】：細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。
非變性液提取
1. 去除細胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液過少會使細胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。
2. 用槍吹打數(shù)下，冰上放置10min后轉(zhuǎn)移裂解液至離心管柱中。
3. 14,000 rpm 室溫離心1 min。
4. 收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液。【注】：細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。
二、懸浮細胞
變性液提取
1. 收集細胞 0.5~2x107 于1.5mL離心管中，1mL預(yù)冷的PBS洗滌兩次，1,000xg 離心3min，棄上清，重復(fù)三次。
2. 根據(jù)細胞沉淀體積加入同體積的預(yù)冷PBS重懸細胞后，根據(jù)細胞量加入對應(yīng)量的變性裂解液。【注】：表中為推薦用量；PBS不可多加，只要能使細胞重懸即可。
細胞沉淀體積（uL） | 加入裂解液體積（uL） |
3 | 20 |
5 | 50 |
10 | 150 |
20 | 250 |
40 | 500 |
3. 劇烈震蕩15s后，轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。【注】：少量沒有裂解的細胞不影響最終蛋白提取的質(zhì)量。
4. 14,000 rpm 室溫離心1min（如果裂解液過于粘稠可增加離心時間）。
5. 收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液。【注】：細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。
非變性液提取
1. 收集細胞 0.5~2x107 于1.5mL離心管中，1mL 預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次，1,000xg 離心 3min ，棄上清，重復(fù)三次。
2. 根據(jù)細胞量加入對應(yīng)量的非變性裂解液。【注】：表中為推薦用量。
細胞沉淀體積（uL） | 加入裂解液體積（uL） |
3 | 20 |
5 | 50 |
10 | 150 |
20 | 250 |
30 | 500 |
40 | 500 |
3. 劇烈震蕩15s后，冰上孵育10min。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。
5. 14,000 rpm 室溫離心1min
6. 收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液。【注】：細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。
三、組織樣品
變性液提取
1. 把組織剪切成小碎片。
2. 加入適當(dāng)裂解液，一般100mg 組織加入1mL 裂解液。【注】：如果裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液。
3. 用組織勻漿器或研磨棒在1.5mL離心管中研磨組織，直至充分裂解。【注】：如果是心肌，皮膚等不易研磨的組織應(yīng)使用勻漿器勻漿。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。
5. 14,000 rmp 室溫離心1min（如果裂解液過于粘稠可增加離心時間）。
6. 收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液。【注】：如果組織樣品非常小，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex裂解。
非變性液提取
1. 組織剪切成小碎片。
2. 加入適當(dāng)裂解液，一般100mg 組織加入1ml 裂解液。【注】：如果裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液。
3. 用組織勻漿器或研磨棒研磨組織，直至充分裂解。冰上放置10min。【注】：如果是心肌，皮膚等不易研磨的組織應(yīng)使用勻漿器勻漿。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。
5. 14,000 rmp 室溫離心1min。
6. 收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液。【注】：如果組織樣品非常小，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex裂解。
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 本產(chǎn)品不含蛋白酶抑制劑，使用中應(yīng)加入蛋白酶抑制劑混合物(100×, 不含EDTA)(貨號: AP02L084) 防止蛋白降解。
3. 本產(chǎn)品不兼容Bradford法測蛋白濃度，請使用 BCA蛋白定量試劑盒（貨號： AP12L025）。
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