產(chǎn)品簡(jiǎn)介
PikoGreen dsDNA quantitation reagent（優(yōu)于PicoGreen）是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料，于雙鏈DNA的定量。測(cè)定DNA濃度在cDNA文庫(kù)構(gòu)建、DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物估測(cè)等領(lǐng)域中非常重要，另外疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測(cè)因關(guān)系人身健康，顯得尤為重要。

產(chǎn)品型號(hào)：AN54L029

更新時(shí)間：2025-10-16

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問(wèn)量：3127

產(chǎn)品咨詢(xún) 18616108315

產(chǎn)品分類(lèi)

PRODUCT CLASSIFICATION

PCR&q-PCR

RT-PCR PCR q-PCR 直擴(kuò)PCR 核酸定量測(cè)定

查看全部產(chǎn)品

相關(guān)文章

這樣做能防止胎牛血清產(chǎn)生沉淀

【干貨分享】如何選擇胎牛血清

如何避免胎牛血清使用時(shí)出現(xiàn)黑點(diǎn)

DNA聚合酶和RNA聚合酶的異同點(diǎn)

詳細(xì)介紹在線(xiàn)留言

品牌	其他品牌	貨號(hào)	AN54L029
規(guī)格	1ML	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測(cè)低至25 pg/m	應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)品描述

PikoGreen dsDNA quantitation reagent是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料，僅與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測(cè)低至25 pg/mL的dsDNA。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比，具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，耐受性好，線(xiàn)性范圍寬及方便操作等優(yōu)點(diǎn)，適用于cDNA文庫(kù)構(gòu)建、DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物等領(lǐng)域的DNA濃度的精確測(cè)定。相比傳統(tǒng)的方法，Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢(shì)：

靈敏：數(shù)量級(jí)較UV吸光讀數(shù)更敏感，可節(jié)省樣品。
特異性強(qiáng)：只結(jié)合dsDNA，特異性強(qiáng)，不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA，蛋白，RNA等影響。
耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無(wú)需從反應(yīng)混合物中純化DNA。
線(xiàn)性范圍寬：PikoGreen dsDNA染料測(cè)定DNA濃度，在100pg/ml-100ng/ml范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性；熒光計(jì)兼容。
容易使用：在樣品中加入染料，等待5~6 min染色，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板。與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和可適用于各種DNA樣品分析、PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測(cè)和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

該分析在四個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈線(xiàn)性，且?guī)缀鯚o(wú)序列依賴(lài)性，可以精確地測(cè)量多個(gè)來(lái)源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。該方法因其穩(wěn)定性、靈敏性，已經(jīng)錄入《中國(guó)藥典》。
訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)	規(guī)格
PikoGreen dsDNA quantitation reagent(優(yōu)于PicoGreen)	AN54L029	1 mL

運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃避光保存，有效期24個(gè)月。
使用方法
1. PikoGreen工作液的配制
使用前將PikoGreen dsDNA定量試劑回溫至室溫；PikoGreen以100 µL 200×的濃縮液形式保存于無(wú)水DMSO中的（共10管）。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用1×TE按1:200 的比例稀釋適量定量試劑濃縮液。例如要準(zhǔn)備足夠的操作溶液以2 mL檢測(cè)體系測(cè)定20個(gè)樣品，可向19.9 mL 1×TE 中加入100 µL PikoGreen dsDNA 定量試劑。工作液見(jiàn)光易降解，盡量在配好后幾小時(shí)內(nèi)使用。
2. 配制標(biāo)準(zhǔn)品DNA溶液
（1）用1 X TE溶液溶解dsDNA制備1 μg/mL dsDNA 。根據(jù)在1 cm 光程長(zhǎng)度的比色杯中A260 nm時(shí)的吸光度確定DNA 濃度；相應(yīng)于1 μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。標(biāo)準(zhǔn)液常用小牛胸腺DNA制備，PikoGreen 試劑測(cè)定法在通常污染核酸*劑的幾種復(fù)合物存在的條件下仍能保持線(xiàn)性良好，但是，為了得到有效的對(duì)照處理，被用來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的dsDNA 溶液要用和實(shí)驗(yàn)樣品相同的方式來(lái)處理，并且應(yīng)該包含相同的可能存在的污染物。
（2）制備從0.5 ng/mL 到500ng/mL（見(jiàn)表1）單重復(fù)8 個(gè)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液，然后與等體積的PikoGreen 工作液混和，放入1 x 1cm 比色杯中?；旌舷嗤w積的1 x TE 和PikoGreen 操作溶液作為空白對(duì)照,避光于室溫下放置2~5 min。

表1: 用1 x 1cm 比色杯時(shí)DNA 標(biāo)準(zhǔn)濃度配制參考

標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液濃度（ng/mL）	標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液體積（mL）	PikoGreen 工作液體積（mL）	標(biāo)準(zhǔn)DNA 終濃度(ng/mL)
1000	1	1	500
200	1	1	100
50	1	1	25
20	1	1	10
5	1	1	2.5
2	1	1	1
1	1	1	0.5
0	1	1	空白

（3）當(dāng)用微量檢測(cè)皿適配器時(shí)，PikoGreen 測(cè)定也可在較低的測(cè)定體積（50 μL 到200 μL）內(nèi)完成。產(chǎn)生從1 ng/mL 到100 ng/mL（見(jiàn)表2）的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液，然后與等體積的PikoGreen 工作液混和，將至少50 μL 溶液轉(zhuǎn)移到微量檢測(cè)皿中。確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測(cè)皿的外部經(jīng)?？梢则?qū)散氣泡。避光于室溫下放置2-5 min。

表2：用微量檢測(cè)皿DNA 標(biāo)準(zhǔn)濃配制參考

標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液濃度（ng/mL）	標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液體積（mL）	PikoGreen 工作液體積（mL）	標(biāo)準(zhǔn)DNA 終濃度(ng/mL)
200	30	30	100
50	30	30	25
20	30	30	10
5	30	30	2.5
2	30	30	1
0	30	30	空白

（4）孵育后用合適的熒光計(jì)測(cè)量樣品熒光值。Ex/Em=480 nm/520 nm，為了減少光漂白，應(yīng)保持所有樣品的檢測(cè)時(shí)間一致。用熒光值最大的樣品校正儀器。
（5）用檢測(cè)數(shù)據(jù)與DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度做回歸分析，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
3. 樣品分析
（1）用1 x TE 稀釋待測(cè)DNA 樣品至需要的體積（1x1 cm 比色杯需1.0 mL，微量檢測(cè)皿需25~100 μL）。對(duì)樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被最大限度地沖淡。然而，也要避免取樣體積太小而無(wú)法精確吸取的情況。
（2）在每個(gè)樣品中加入等體積PikoGreen 工作液，混合好，將混合物移入合適的比色杯，避光于室溫下放置2~5 min。
（3）檢測(cè)、讀取熒光值，換算樣品中dsDNA濃度?？梢詫?duì)樣品進(jìn)行不同的稀釋處理重復(fù)測(cè)定以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。
注意事項(xiàng)

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
PikoGreen定量試劑含有DMSO，PikoGreen 是結(jié)合dsDNA，操作時(shí)采取適當(dāng)防護(hù)，戴手套小心操作。
盡管常見(jiàn)污染物不會(huì)影響PikoGreen 檢測(cè)dsDNA濃度（見(jiàn)表3），但是當(dāng)樣品中dsDNA濃度太低，RNA, ssDNA濃度超過(guò)dsDNA 10倍以上時(shí)，RNA, ssDNA等污染還是會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生較大干擾，在此種情況下，RNA 酶可以消除RNA干擾, RNA 酶A、酶T1 、核酸酶S1 結(jié)合能除去ssDNA干擾，從而保證樣品熒光值是由dsDNA 產(chǎn)生。

表3：Pikogreen定量耐受的污染物列表

物質(zhì)名稱(chēng)	最大耐受濃度	信號(hào)變化百分比
Salts
Ammonium acetate	50 mM	3% decrease
Sodium acetate	30 mM	3% increase
Sodium chloride	200 mM	30% decrease
Zinc chloride	5 mM	8% decrease
Magnesium chloride	50 mM	33% decrease
Urea	2 M	9% increase
Organic Solvents
Phenol	0.1%	13% increase
Ethanol	10%	12% increase
Chloroform	2%	14% increase
Detergents
Sodium dodecyl sulfate	0.01%	1% decrease
Triton X-100	0.1%	7% increase
Proteins
Bovine serum albumin	2%	16% decrease
IgG	0.1%	19% increase
Other Compounds
Polyethylene glycol	2%	8% increase
Agarose	0.1%	4% increase