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更新時(shí)間：2023-12-19
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凋亡檢測(cè)試劑盒 · 介紹
[產(chǎn)品] Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
[貨號(hào)] AC12L033
[規(guī)格] 100T
細(xì)胞凋亡簡(jiǎn)單介紹
細(xì)胞凋亡又稱(chēng)程序性細(xì)胞死亡，是一種正常的生理過(guò)程，這種細(xì)胞死亡方式與細(xì)胞壞死不同，他不會(huì)引起機(jī)體的炎癥反應(yīng)。細(xì)胞凋亡在機(jī)體內(nèi)受到高度調(diào)節(jié)，旨在犧牲特定細(xì)胞為生物體謀取更多益處，細(xì)胞凋亡廣泛存在于生長(zhǎng)發(fā)育和衰老的各個(gè)環(huán)節(jié)中，有時(shí)也作為一種防御機(jī)制。
細(xì)胞凋亡過(guò)程中，細(xì)胞具有典型的形態(tài)學(xué)特征：第1階段中（持續(xù)時(shí)間很短）細(xì)胞的間接觸消失，但胞膜尚完整，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體脫落，細(xì)胞核出現(xiàn)固縮；第2階段中細(xì)胞核碎裂后與細(xì)胞內(nèi)的各種細(xì)胞器結(jié)合，并進(jìn)一步被質(zhì)膜包裹形成凋亡小體；第3階段中吞噬細(xì)胞吞噬凋亡小體，將其消化并重新供機(jī)體使用。
細(xì)胞凋亡信號(hào)通路
細(xì)胞凋亡的途徑主要有兩種且相互關(guān)聯(lián)，外源性或死亡受體途徑、內(nèi)在性或線粒體途徑。外源性途徑涉及跨膜受體介導(dǎo)的相互作用，當(dāng)細(xì)胞表面的死亡受體（FAS受體）被激活，啟動(dòng)半胱天冬酶（Caspase）級(jí)聯(lián)反應(yīng)，該反應(yīng)能導(dǎo)致細(xì)胞死亡；而內(nèi)在途徑直接在細(xì)胞內(nèi)啟動(dòng)，由線粒體釋放促凋亡蛋白（SMAC和細(xì)胞色素C），從而激活半胱天冬酶，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
細(xì)胞凋亡如何檢測(cè)（基于生物學(xué)功能、生化標(biāo)記方法）
（1）Annexin V-FITC/PI檢測(cè)法
磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）為帶負(fù)電荷的磷脂，位于正?；罴?xì)胞細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞凋亡早期 PS 發(fā)生外翻，暴露于細(xì)胞膜外側(cè)。Annexin V(AV)是一種分子量約為36 kDa 的Ca2+依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，與PS有高度親和力，因此利用FITC標(biāo)記的AV蛋白可以結(jié)合細(xì)胞膜外側(cè)的PS，用于指示早期凋亡細(xì)胞。
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種核酸染料，PI 無(wú)法通過(guò)正常的細(xì)胞膜或早期凋亡的細(xì)胞膜, 但可以透過(guò)凋亡中晚期細(xì)胞或者壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜并對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色，用以區(qū)分存活的早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞以及壞死細(xì)胞。
因此FITC-Annexin V 與PI 雙染方法可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)。
（2）JC-1 線粒體膜電位檢測(cè)
線粒體膜電位降低是細(xì)胞早期凋亡的一個(gè)標(biāo)志，當(dāng)線粒體膜通透性發(fā)生改變時(shí)，膜電位會(huì)降低。JC-1 是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位△ Ψm 的理想熒光探針，在線粒體膜電位較高時(shí)，產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時(shí)，產(chǎn)生綠色熒光。
（3）TUNEL檢測(cè)法
細(xì)胞凋亡的一個(gè)顯著特點(diǎn)是細(xì)胞染色體 DNA 的降解，這種降解非常特異并有規(guī)律，所產(chǎn)生的不同長(zhǎng)度的 DNA 片段約為 180 bp-200 bp 的整數(shù)倍，表現(xiàn)為瓊脂糖凝膠電泳中呈現(xiàn)特異的梯狀 Ladder 圖譜。
TUNEL 法可以選擇性的對(duì)凋亡細(xì)胞直接進(jìn)行原位檢測(cè)， 而非壞死細(xì)胞或因輻照和藥物治療而造成的 DNA 鏈斷裂的細(xì)胞，是一種更快速、直接的檢測(cè)手段。
（4）凋亡相關(guān)分子檢測(cè)法
在半胱天冬酶家族中，Caspase-1、3、7和8主要參與細(xì)胞凋亡過(guò)程。測(cè)量活細(xì)胞中的 Caspase 1 活化能夠檢測(cè)細(xì)胞凋亡。Caspase-3 具有特異性的底物多肽識(shí)別序列，通過(guò) Caspase 3 作用，斷裂 Rh 110 多肽，產(chǎn)生具有強(qiáng)烈綠色熒光的 Rh 110。Caspase-8由CASP8基因所編碼，已被證明具有底物選擇性，通過(guò) Caspas-8 的切割 R110 肽產(chǎn)生強(qiáng)綠色熒光。
（5）DNA染色檢測(cè)法
Hoechst 33258 和Hoechst 33342是一種低細(xì)胞毒性的穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。Hoechst 33258 為特異性 DNA 染料，與 A-T 鍵結(jié)合，這種染料對(duì)死細(xì)胞或經(jīng)70%冷乙醇固定的細(xì)胞可立即染色，而活細(xì)胞的著色是漸進(jìn)性的，在 10 min 內(nèi)可達(dá)飽和。在熒光顯微鏡下，活細(xì)胞核呈彌散均勻熒光，出現(xiàn)細(xì)胞凋亡時(shí)，細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)濃染致密的顆粒塊狀熒光。
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