ecL化學(xué)發(fā)光液的操作注意事項是什么

更新時間：2018-09-10

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ecL化學(xué)發(fā)光液注意事項，由于不同品牌的抗體質(zhì)量不同，以及抗體的保存條件和保存時間的不同，初次使用時建議對抗體用量進行優(yōu)化，以取得更優(yōu)效果。勿將ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒暴露在陽光或強光下，否則會導(dǎo)致其失活；建議保存在棕色瓶中，并避免長時間暴露在陽光下，實驗室光照對試劑盒影響不大；除了X光膠片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作。使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤狀態(tài)；使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產(chǎn)生。使用前配制ECL工作液，體積足夠覆蓋膜片即可；取A液和B液時一定要用不同的槍頭，互相污染可能導(dǎo)致緩慢失活；配制完畢建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低；棄去使用過的混合試劑。印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時發(fā)出的光，然后隨著時間的延長而緩慢減弱，至30 min仍可保持90%的光信號，至24小時仍可保持約60%的光信號；蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間；使用過少的ECL工作液不利反應(yīng)進行，為達節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低ECL工作液使用比例。使用生物素/親和素體系時，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因為脫脂奶粉中含有多種內(nèi)源性生物素，容易產(chǎn)生非特異性信號。避免將多張膜置于同一個洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

ecL化學(xué)發(fā)光液使用方法，印跡膜制備：執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標記的抗體或者HRP標記的核酸探針孵育、洗膜；ECL工作液含有HRP催化的發(fā)光底物，檢測系統(tǒng)必須基于HRP酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要，所有步驟均在室溫下完成。ECL工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，混合均勻并盡快使用；將膜片置混合液中，于室溫下孵育約1分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆蓋全膜片，注意不要在膜片表面形成氣泡。蛋白或核酸信號顯現(xiàn)，用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑，僅留下少量液體覆蓋表面，不可讓膜*干燥。將膜片置于保鮮膜上，吸附蛋白面朝上，小心趕盡氣泡。用電子裝置感光，或在暗室中用X光片曝光，根據(jù)信號強弱適當調(diào)整曝光時間，也可選擇不同時間多次曝光，以取得更佳效果。

ecL化學(xué)發(fā)光液高靈敏性，能快速檢測更廣泛的蛋白范圍，可檢測低達約300飛克的蛋白量。信號穩(wěn)定，發(fā)光時間長，能進行多次曝光，30min后仍可維持約90%的發(fā)光強度，6小時后仍能維持60%以上的發(fā)光強度。信號強，發(fā)光信號比對碘苯酚增強的HRP-魯米諾檢測體系更強。穩(wěn)定性高，試劑盒可在室溫長期穩(wěn)定存放。