活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間：2017/11/16

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活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)	規(guī)格	保存	價(jià)格（元）
活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒	D3100L4053	100T(1ml)	4℃	245

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（formazan，參考圖1)。WST-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

圖1：WST-8分子結(jié)構(gòu)及檢測(cè)原理

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。CCK-8在4℃可保存一年，在-20℃可以存放數(shù)年，反復(fù)凍融會(huì)造成測(cè)定背景O.D值升高，如經(jīng)常使用，建議存放于4℃即可。

操作方法

1. 在96孔板中配制100 μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí) (在37℃，5% CO2的條件下)。

2. 向培養(yǎng)板加入10 μl不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。如果測(cè)定細(xì)胞活性，則不需要2-3步驟，直接從第四步操作。

3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6, 12, 24或48小時(shí))。

4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù))。

5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。

注意事項(xiàng)

1）CCK-8試劑盒的檢測(cè)依賴(lài)于脫氫酶催化反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中有較多還原劑（或抗氧化劑）會(huì)造成背景O.D值升高，干擾檢測(cè)結(jié)果。如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑，請(qǐng)檢查背景的O.D值，即測(cè)定、比較空白培養(yǎng)基加入藥物與不加藥物的培養(yǎng)基（含細(xì)胞）在加入CCK- 8試劑后的O.D值，如果空白O.D值明顯偏高，則說(shuō)明有反應(yīng)，應(yīng)設(shè)法去除或折算干擾因素。

2）如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測(cè)。細(xì)胞培養(yǎng)基酚紅不影響測(cè)定結(jié)果。

3）為使CCK-8試劑盒培養(yǎng)基充分混勻，減少CCK-8在移液器上的殘留，建議加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑，混勻后加樣。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

CCK-8與同類(lèi)試劑比較

檢測(cè)方法	MTT法	XTT法	WST-1法	CCK法
產(chǎn)品性狀	粉末	2瓶溶液	溶液	1瓶溶液
使用方法	配成溶液后使用	現(xiàn)配現(xiàn)用	即開(kāi)即用	即開(kāi)即用
檢測(cè)靈敏度	高	很高	很高	高
檢測(cè)時(shí)間	較長(zhǎng)	較短	較短	zui短
檢測(cè)波長(zhǎng)	560-600nm	420-480nm	420-480nm	430-490nm
細(xì)胞毒性	高，細(xì)胞形態(tài)*消失	很低，細(xì)胞形態(tài)不變	很低，細(xì)胞形態(tài)不變	很低，細(xì)胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性	一般	較差	一般	很好
批量樣品檢測(cè)	可以	非常適合	非常適合	非常適合
便捷程度	一般	便捷	便捷	非常便

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)	規(guī)格	保存	價(jià)格(元)
活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒	D3100L4053	100T(1ml)	4℃	245
活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒	D3100L4054	500T(5ml)	4℃	595
活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒	D3100L4055	1000T(10ml)	4℃	1050
活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒	D3100L4056	3000T(30ml)	4℃	2080
活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒	D3100L4057	10000T(100ml)	4℃	5850

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