Recombinant Enterokinase重組腸激酶使用說明書

發(fā)布時(shí)間：2017/11/15

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Recombinant Enterokinase重組腸激酶

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產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	保存	價(jià)格(元)
Recombinant Enterokinase重組腸激酶	D2101L1001	500 U	-20℃	1050

產(chǎn)品簡介

腸激酶（Enterokinase）是一種絲氨酸蛋白酶，高度專一性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列，在Lys的C端水解多肽/融合蛋白，去除融合標(biāo)簽，釋放出目的蛋白。但天然腸激酶來源有限，并且從動物組織提取的腸激酶污染有其他蛋白酶，這給實(shí)際應(yīng)用帶來了困難。重組腸激酶（rEK）是高純度的牛腸激酶輕鏈亞基，它有著和天然提取的腸激酶同樣特異的切割酶活性，且切割速率更快。重組腸激酶（rEK）被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。

本產(chǎn)品為采用重組酵母分泌表達(dá)的高純度、高活性的牛腸激酶，適用范圍廣（4～45℃，pH4.5～9.5），并且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。因經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶。本制品不含有非特異性的蛋白酶切活性。

技術(shù)參數(shù)

來源（Source）	重組酵母Yeast
分子量（Molecular Weight）	理論值25.850 kDa
外觀（Appearance）	透明液體
酶濃度（Enzyme Concentration）	4U/uL
活性定義（Activity Definition）	在37℃，16小時(shí)內(nèi)將0.5毫克的Thioredoxin-NP-27 95%降解為NP-27所需要的酶量定義為1個活性單位(1U) 。
內(nèi)毒素檢測（Endotoxin）	用LAL法測定內(nèi)毒素含量小于1EU/μg
質(zhì)量保證（Quality assurance）	經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶；本制品中不含有非特異性的蛋白酶切活性。

運(yùn)輸與保存方法

-20℃保存，冰袋運(yùn)輸。質(zhì)保期12個月

使用方法（參考舉例）

1. 反應(yīng)體系構(gòu)建，以1000μl為例，反應(yīng)體系如下：

融合蛋白	0.5-1mg(蛋白濃度：0.1-1mg/ml)
Recombinant Enterokinase重組腸激酶	0.5-2.5 uL (相當(dāng)于2-10U)
10 x rEK反應(yīng)緩沖液	100μL
超純水	根據(jù)需要補(bǔ)充體積到1000μl

注：10 x rEK反應(yīng)緩沖液配方：0.5M Tris-HCl，pH 8.0（22℃），10mM CaCl，1% Tween-20。

2. 酶切反應(yīng)， 25 °C過夜酶切。

3. （可選）重組腸激酶的去除，后續(xù)如需去除重組腸激酶，可用陰離子交換樹脂（eg.DEAE-FF）對其進(jìn)行洗脫。推薦洗脫條件如下：

平衡緩沖液：25mM Tris-HCl pH8.0

洗脫緩沖液：25mM Tris-HCl pH8.0，含100mM NaCl

注：① 如果使用純化柱，注意流速不要太快。確保樣品與膠的接觸時(shí)間不少于10min。也可以直接將膠加入到酶切緩沖液中直接動態(tài)吸附30min。② 如酶切緩沖液中含有其他成分，如NaCl，甘油等，會影響吸附效果。

注意事項(xiàng)

1．如果樣品溶液中含如下成分的一種或多種，且含量大于所列數(shù)值，為獲得理想的酶切結(jié)果，請先將樣品透析到1×反應(yīng)緩沖液中，然后再進(jìn)行酶切實(shí)驗(yàn)。

>2M Urea，>250mM NaCl，>20mM β-ME，>0.1% SDS，>50mM imidazole。

2）磷酸鹽對Enterokinase有很強(qiáng)的抑制作用，痕量的磷酸鹽都會嚴(yán)重影響Enterokinase的活性，因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽。

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