D-熒光素鉀鹽使用說明書

發布時間：2017/11/13

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D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽*（超純）

產品名稱	貨號	規格	保存	價格(元)
D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽*（超純）	C6301L1330	25 mg	-20℃	650

產品描述

D-Luciferin Free acid, potassium salt, and sodium salt *UltraPure Grade*D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術領域，特別是體內活體成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發光。當熒光素過量時，產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質粒轉染入細胞后，導入研究動物如大小鼠體內，之后注入熒光素，通過生物發光成像技術（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據生物發光強度的變化來指示能量或生命體征。

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前市場上有三種產品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內實驗。配成液體后的這三種產品，在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別。

產品性質

中文別名（Chinese synonym）	D-熒光素鉀鹽
英文別名（English synonym）	(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt; D-Luciferin firefly, potassium salt;
CAS號（CAS NO.）	115144-35-9
分子式（Formula）	C11H7N2O3S2 K
分子量（Molecular weight）	318.42 g/mol
外觀（Appearance）	淡黃色粉末
溶解性（Solubility）	溶于水（60 mg/ml）
純度（Purity）（HPLC）	＞99%

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，保質期12個月。

使用方法

1．體外生物發光檢測

1）用蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成100 mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。

2）用預熱好的組織培養基1:200稀釋儲存液，配制工作液（終濃度150µg/ml）。

3）去除培養細胞的培養基直至無殘留。

4）待圖像分析前，向細胞內添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析（或者細胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強信號）。

2．活體成像分析

1）用無菌的DPBS（w/o Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽工作液（15mg/ml），0.2µm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

2）注射量取決于注射方式，具體如下：

注射方式	劑量
靜脈注射（25-27gauge針頭）	按10µl/g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液
腹腔注射（25-27gauge針頭）	按10µl /g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液
肌肉注射（27gauge針頭）	50µl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液
鼻內注射（pipette）	50µl，濃度為3mg/ml熒光素工作液

3）注射入體內10-20 min（待光信號達到zui強穩定平臺期），再進行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定zui高信號檢測時間和信號平臺期。

注意事項

1) 本品（firefly luciferin）和甲蟲熒光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，僅僅是不同公司在命名上的差異。

2) 本品保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復凍融。如果有條件，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩定性和保存時間更長，長達1年。

3) 注射方式，動物類型以及體重等都會影響信號的發射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定*信號平臺期和*的檢測時間。

4) 熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發表的文獻來看，鉀鹽的使用率遠高于鈉鹽，尤其是體內實驗。兩者功效相同。

5) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

1、熒光素可以用于動物活體嗎？

答：我們許多客戶用熒光素作用于動物活體，目前世界上合成熒光素主要有兩大生產商，因此目前您使用的就是這兩種生產商其中之一生產的。請注意：Promega出售的熒光素是Beetle Luciferin，而我們公司出售的是Firefly Luciferin，但這兩種的結構是相同的（結構式如下）。

2、怎么溶解熒光素？溶解后怎樣使它穩定？

答：許多客戶已經告訴我們熒光素溶于水中，然后分裝好保存于-80℃，不會有重大的影響。然而，關于溶解后熒光素的穩定性也有相矛盾的報道。對于大多敏感的實驗，為了減少一些實驗中的可變因素我們強烈建議您現配現用（比如低濃度的酶或者不合適的反應溫度或不合適的鹽濃度等等可能需要高濃度的底物來驅使反應的完成。）

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