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技術文章
TECHNICAL ARTICLES
更新時間：2024-05-06
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近年來，通過輸注免疫細胞或干細胞進行相關疾病的治療取得良好療效，細胞治療技術展示出越來越廣闊的臨床應用前景。通常細胞從采集到臨床應用會間隔很長時間，而新鮮細胞產品保存時限較短，為了延長細胞保存時限或長期保存細胞產品，需要對細胞進行冷凍后儲存。
細胞冷凍保存的原理
細胞凍存是通過冷凍保護機制將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝，保持細胞活性，以便長期儲存的一種技術。細胞復蘇后，蛋白質仍有活性，細胞的結構和功能仍完好。
隨著溫度降低，細胞內外的水分都會結晶，所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞，特別是0~-20℃的階段，冰晶呈針狀，極易引發細胞損傷。在不加任何保護劑條件下直接凍存細胞時，細胞內外環境中形成的冰晶，能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等，引起細胞死亡。
如果在細胞溶液中加入冷凍保護劑，可保護細胞免受溶質損傷和冰晶損傷。冷凍保護劑容易同水分子結合，降低冰點，在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水分在凍結形成冰晶前透出細胞，并且通過降低未結冰溶液中電解質的濃度，使細胞免受溶質損傷，細胞得以在超低溫（液氮）條件下保存。冷凍保護劑對細胞的冷凍保護效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復溫速率有關，且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣。
細胞冷凍保護劑
細胞冷凍保護劑可以根據否穿透細胞膜分為滲透性和非滲透性兩種。滲透性冷凍保護劑可以透過細胞膜滲透到細胞內，多為小分子，包括二甲基亞砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇等，這類保護劑能夠在細胞冷凍懸液凝固之前，穿過細胞膜滲透到細胞內，減少細胞內冰晶的形成，從而減少細胞損傷。DMSO是臨床級凍存保護劑中重要的成分，目前經典的凍存保護劑中通常含有10%左右的DMSO。DMSO是常用的凍存保護劑和常用藥用輔料，在國家藥品監督管理局藥品審評中心藥用輔料數據庫可以查詢到其詳細信息。非滲透性冷凍保護劑一般是一些大分子物質，不能滲透到細胞內，主要包括右旋糖苷、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白等，其可以優先同溶液中的水分子相結合，使冰點降低，減少冰晶的形成。由于其分子量大，可以使溶液中電解質濃度降低，從而減輕溶質損傷，同時能降低溶液中低分子溶質（電解質）濃度，減輕鹽損傷。
細胞冷凍保存的一般流程
細胞凍存過程要緩慢，復蘇則相反，應快速升溫。慢凍的原因如上所述，為了避免降溫時，細胞內的水分還未來得及脫離細胞，但卻形成冰晶，對細胞造成損傷。（1）凍存前觀察細胞狀態，測定細胞活率和計數。（2）將要凍存的細胞收集于離心管中，1200~1800rpm，離心5min，棄上清。（3）根據需要調整細胞凍存密度，緩慢加入適當體積配制好預冷的凍存液或市售的無血清細胞凍存液，重懸細胞。（4）將細胞懸液分裝至凍存管中，旋緊管蓋，做好標記。（5）將凍存管放入程序降溫盒（預冷）內，然后放至-80℃冰箱過夜，次日轉移至液氮罐中長期保存。
如何選擇細胞凍存液
細胞凍存液的質量和成分對細胞的凍存效果有很大的影響。如果細胞凍存液的成分不合適或質量不達標，可能會導致細胞凍存失敗或細胞復蘇后存活率低。
選擇細胞凍存液時，應考慮以下3個重要因素：
（1）細胞類型，不同的細胞類型對細胞凍存液的成分和濃度有不同的要求。
（2）凍存時間，細胞凍存的時間越長，對細胞凍存液的要求越高。
（3）復蘇率，細胞凍存液的質量和成分對細胞的復蘇率有很大的影響。
下面給你介紹下李記生物~李記生物細胞凍存液的主要產品：
藥輔級細胞凍存液（非程序降溫）
快速細胞凍存液（GMP級）
無血清細胞凍存液（無DMSO）
無血清細胞凍存液（增強型）
快速細胞凍存液（無血清、無蛋白）
和元李記快速細胞凍存液（無血清、無蛋白）可適應于絕大部分腫瘤細胞和常規細胞，大部分干細胞（和元李記已測試細胞種類請關注），凍存細胞可在 -80℃ 長期保存（＞6年）。不含動物源性蛋白，不含血清成分，可有效減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養成分，提高細胞存活率和活力，亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。
無需程序性降溫，可直接將細胞放入凍存液置于-80℃冰箱（-80℃可保存＞6年），凍存液無需稀釋。
凍存液不含血清，大大降低細胞污染可能性。
不要加血清，不要反復逐級降溫，不要液氮，綜合下來省時更省錢。
案列可于-資源支持查詢！
各細胞凍存數據，可參考下方李記凍存液數據庫（數據由使用客戶反饋）
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| 快速細胞凍存液（無血清、無蛋白） | AC05L032 | 30mL |
| 快速細胞凍存液（無血清、無蛋白） | AC05L033 | 100mL |
常溫運輸。4℃保存，有效期24個月。
產品描述
李記生物無血清細胞凍存液（無DMSO）適用于多種細胞的冷凍保存，尤其適用于原代肝細胞、神經細胞等的凍存。
訂購信息
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| 無血清細胞凍存液（無DMSO） | AC05L164 | 100mL |
產品參數
| pH值： | 25±2℃時，7.2-7.8 |
| 細菌： | 陰性 |
| 真菌： | 陰性 |
| 支原體： | 陰性 |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃密封保存，有效期12個月。
產品描述
李記生物無血清細胞凍存液（增強型）適用于常用動物細胞系的冷凍保存，尤其適用于原代細胞、干細胞等的冷凍保存。
訂購信息
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| 無血清細胞凍存液（增強型） | AC05L053 | 100mL |
產品參數
| 外觀： | 淡黃色澄清溶液 |
| pH值： | 25±2℃時，7.2-7.8 |
| 細菌： | 陰性 |
| 真菌： | 陰性 |
| 支原體： | 陰性 |
| 內毒素： | <1 EU/mL |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃密封保存，有效期24個月。
和元李記快速細胞凍存液（GMP級）不含動物源性蛋白，不含血清成分，可有效減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。通用于各種動物細胞株，尤其適用于各類原代細胞、干細胞及雜交瘤等蛋白表達細胞的凍存。
本產品含多種保護劑、穩定劑組合，可顯著降低凍存過程中溶液冰點，提高細胞膜對水的通透性，有效防止冰晶對細胞的損傷；同時降低冰凍時細胞周圍電解質濃度，避免電解質損傷；還可延緩凍存過程中細胞的互相擠壓，保護細胞膜。從而極大提高細胞復蘇率和活力。
便捷：即用型，無需程序性降溫，可直接將細胞放入凍存液置于-80℃冰箱，也可在后續轉移至液氮中進行長期保存。
高效：細胞存活率和復蘇活力高，普遍高于90% 。
安全：無血清，無動物源成分，化學成分明確，大大降低細胞污染可能性。
質優：嚴格的質量控制，產品性能媲美進口；所有原料均選自經嚴格檢測的低內毒素、高純藥用級別原料，采用低DMSO配方，注射用水配置符合GMP生產。
批間差異小：全程于GMP潔凈車間生產與包裝，并經過嚴格的內毒素、滲透壓、 PH、細菌病原體等質量檢測，確保產品質量及批次間的一致性。
適用范圍廣：通用于各種動物細胞株，尤其適用于各類原代細胞、干細胞及雜交瘤等蛋白表達細胞的凍存；已通過實驗證明不不會影響干細胞表型和生長狀態，且可維持干細胞的多分化性。
案列可于-資源支持查詢！
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| 快速細胞凍存液（GMP級） | AC05L043 | 100mL |
藍冰運輸。4℃保存，有效期12個月。
產品描述
藥輔級細胞凍存液（非程序降溫）是由李記生物自主研發的含有7.5% DMSO，無血清、無動物成分的即用型細胞凍存液，在超低溫（-80℃～-196℃）環境下為細胞提供一個安全、有效的保護環境，凍存復蘇后細胞活率可達90%以上。
本產品含有甘氨酸，DMSO以及磷酸鹽緩沖液的水溶液，適用于間充質干細胞的冷凍保存。
訂購信息
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| 藥輔級細胞凍存液（非程序降溫） | AC05L174 | 100mL |
產品參數
| 外觀： | 澄清透明溶液 |
| 裝量： | 應不低于標示裝量 |
| pH值： | 7.0～7.6（25±2℃） |
| 滲透壓： | 1650～2025 mOsmol/Kg |
| 無菌： | 應無菌生長 |
| 支原體： | 應符合規定 |
| 內毒素： | ＜0.25EU/mL |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃密封保存，有效期24個月。
本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
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