介紹幾種常見的細胞轉染方法

更新時間：2022-09-28

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　　細胞轉染技術主要分為三大類：化學法、物理法及生物學法。但是沒有一種方法是放之四海而皆準的，即沒有任何方法適用于所有細胞和所有實驗。因而只有依據自己的實驗要求選擇理想的方法，才能獲得漂亮的實驗結果。

下面介紹幾種常見的細胞轉染方法：

　　1、DEAE-右旋糖苷法

　　常言道：同性相斥，異性相吸。因而，當帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負電的磷酸骨架相遇，妥妥的火花四射，而后會被細胞膜抱團相擁并通過細胞內吞作用迎客到家。該法可用于瞬時轉染，操作相對簡單、結果可重復，但是對細胞有一定的毒副作用，且轉染時需要血清。

　　2、磷酸鈣法

　　通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見”的磷酸鈣-DNA共沉淀，可使共沉淀中濃縮DNA分子與細胞表面結合并通過內吞作用進入細胞。該法可用于瞬時或穩定轉染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結果容易出現差異，且對許多類型的細胞培養物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性，轉染效率較差。

　　3、人工脂質體法

　　帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，進而可被細胞內吞穩定轉染/瞬時性轉染。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉染效率高、重復型好，但轉染時需要去除血清，轉染效果隨細胞類型變化大。

　　4、電穿孔法

　　有時，細胞有些“油鹽不進”，就是不開放門戶給核酸放行，此時各位小伙伴可采用一些強硬手段—電穿孔法。此法利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，使得DNA通過膜上形成的小孔導入穩定/瞬時性轉染，適用于所有類型的細胞，但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，且需根據不同細胞類型優化電穿孔實驗條件。

　　其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱為粒子轟擊，可將包裹著核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細胞內，適用于瞬時性轉染。該技術可需要昂貴的設備，且細胞死亡率較高。而后者則是通過精細的注射針將核酸送入胞漿中，一次只能輸送一個細胞中，適用于構建轉基因動物或輸送人工染色體。