胎牛血清選擇及使用常見問題解析

更新時(shí)間：2018-09-14

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1、實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?

在國(guó)內(nèi)*的血清是GIBCO和HYCLONE，度和使用范圍非常普遍，但是價(jià)格普遍偏貴。life-ilab這個(gè)品牌是李記生物的自主品牌，國(guó)外直接貼牌，在20多個(gè)品牌中選擇質(zhì)量、批間差異小的大量采購(gòu)，很大程度降低批次間差異。研發(fā)小組及廣大的科研客戶使用反饋效果很好，價(jià)格實(shí)惠！對(duì)于特殊的細(xì)胞李記生物采購(gòu)GIBCO或HYCLONE血源，同樣經(jīng)過檢測(cè)，用實(shí)在的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)確定采購(gòu)批次，而不是迷信品牌。

2、胎牛血清和小牛血清的區(qū)別及注意事項(xiàng)？

來源不同：新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14天的小牛，而胎牛血清(FBS)是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清。

組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，

使用濃度不同：一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

注意事項(xiàng)：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng)，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。

3、怎樣儲(chǔ)存和解凍血清避免產(chǎn)品質(zhì)量受損?

首先需要將血清產(chǎn)品從冷凍箱中取出，先放置于2～8℃冰箱使之溶解，然后放在室溫中使之全融。在融解過程中需要不定時(shí)的輕微晃動(dòng)，使血清成分均勻，減少融化過程中產(chǎn)生沉淀機(jī)會(huì)。

其次，血清長(zhǎng)時(shí)間存放于2-8℃時(shí)，可能會(huì)聚集各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)而形成沉淀或可見的混濁。因此，我們推薦長(zhǎng)期儲(chǔ)存血清需在-20℃以下，并避免反復(fù)凍融。

后，若短期使用存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若在實(shí)驗(yàn)中血清未能一次用完一瓶血清，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)（由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形），再放回冷凍。

4、血清中包含絮狀沉淀是什么？怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。融化過程產(chǎn)生沉淀是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。想要去除這些絮狀沉淀物，有兩種方法：1、可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無法過濾)。2、將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里，大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì)自然消失。

5、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)在2～8℃解凍血清時(shí)，請(qǐng)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。同樣原理，分裝凍存的時(shí)候，須輕微的均勻搖晃，避免產(chǎn)生氣泡，使溫度與成分均一！

(2)勿直接由-20℃直接放置于37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(3)勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

(4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

(5)若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

6、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用完它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

7、為什么要熱滅活血清?

事實(shí)上，大部分細(xì)胞培養(yǎng)不需要滅火血清，僅在培養(yǎng)部分特殊細(xì)胞時(shí)進(jìn)行滅火。如在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等特殊細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。因?yàn)榧訜峥梢詼缁钛a(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。

8、有必要做熱滅活嗎?

在大多數(shù)情況下不需要熱滅活處理，不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!因?yàn)榻?jīng)過熱處理的血清，沉淀物的行程會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察會(huì)發(fā)現(xiàn)有很多的“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

9、血清需要做支原體檢測(cè)嗎

支原體污染是世界性問題，有報(bào)道指出，支原體輕微污染即可影響200多個(gè)基因的表達(dá)，Nature雜志從2013年起，要求涉及細(xì)胞培養(yǎng)的研究，必須進(jìn)行支原體檢測(cè)。李記生物每批次血清均用支原體檢測(cè)試劑進(jìn)行檢測(cè)，可以檢出99.9%的已發(fā)現(xiàn)支原體種類，客戶不需要另外檢測(cè)，但我們?nèi)匀粡?qiáng)烈建議培養(yǎng)細(xì)胞中定期進(jìn)行支原體檢測(cè)，以排除實(shí)驗(yàn)操作中人為帶入支原體污染。